产品货号：
HR8660
中文名称：
一氧化氮检测试剂盒(硝酸还原酶法)
英文名称：
产品规格：
50T
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1～3天
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一氧化氮(Nitric Oxide，NO)，是一种非常重要的生理性的细胞内及细胞间的信号分子，在免疫、神经及循环等系统中起着重要作用。一氧化氮化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO3-)和亚硝酸盐(NO2-),此两种浓度之和(NO3-＋NO2-)才能准确代表NO 水平。
本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色反应测定其浓度的高低。本测试法灵敏、简便且较稳定，可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液、腹水、胸水、脑脊液、胃液、尿液等样本的NO浓度测定。
储存条件：2-8℃避光保存。
有效期：A和B 3个月，其余组分6个月。
注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
●试管 ● 涡旋混匀器 ● 移液器及吸头 ● 离心机 ● 550nm 的分光光度计 ● 37℃恒温水浴锅
使用方法：
一、试剂配制
1．混合试剂的配制：按试剂A：试剂B=1：1 配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配，24 小时内有效。试剂A，试剂B 使用前请放37℃水浴或室温使其溶解后混匀再用。
2．试剂E 工作液配制：
将试剂E 加入90～100℃热双蒸水20 mL中，隔水加热充分溶解；4℃避光保存。
[注]:试剂E 为过饱和溶液，所以在配制时最好用90～100℃热蒸馏水23ml(热胀冷缩)边隔水加热边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前可以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。
3．试剂F 工作液配制：
使用前将试剂F加入双蒸水8mL中溶解后备用；4℃避光保存(如颜色变为深咖啡色不可再用)。
4．显色剂配制：使用前配制，用多少配多少。试剂E 工作液︰试剂F 工作液︰试剂G＝2.5︰1︰1。若能在一个月内用完者也可一次配成。剩余显色剂避光保存。室温较低时会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
5．100μmoL/L标准工作液配制：取0.1 mL标准品(10mmoL/L)用双蒸水定容稀释至10mL(即100倍稀释)，混匀，即为100μmol/L标准应用液。
二、 操作步骤：
使用注意事项：
● 因组织中NO 含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
●试剂A、试剂B和标准品避免反复冻融，如果需要分多次实验，可以在第一次实验时将试剂A和试剂B、标准品分装后再保存，根据每次实验时的试剂用量取出使用。
● 配好的显色剂避光保存。
● 血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。
● 所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
● 样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。
● 需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
(一)血清、尿液、胃液、细胞培养液等样本检测
1．操作表：
注意：
1．室温较低时，所有的试剂均应置于37℃预热5分钟。
2．取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点。例如：可取0.4或0.45ml，但您同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。
2．计算公式：
血清、血浆中NO含量计算：
NO含量(μmol/L)=(测定OD值-空白OD值)/(标准OD值-空白OD值)×标准品浓度(100μmol/L)×样品测试前稀释倍数
3．计算举例：
测人血清中NO 含量，取人血清100μl 进行检测，结果如下，测得空白管吸光度为0.080，标准管吸光度为0.169，测定管吸光度为0.109。血清未稀释，则稀释倍数为1，将数据带入计算公式：
NO含量(μmol/L)=(0.109-0.080)/(0.169-0.080)*100μmol/L*1=32.584μmol/L
(二)、组织样本检测
1．操作表：
注意：
1．室温较低时，所有的试剂均应置于37℃预热5分钟。
2．取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点，但同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。
2．组织样本NO含量计算：
NO含量(μmol/gprot)=(测定OD值-空白OD值)/(标准OD值-空白OD值)×标准品浓度(20μmol/L)÷待测样本蛋白浓度(gprot/L)
注：μmol/gprot为微摩尔/克蛋白。
3．计算举例：
测10%小鼠脑组织匀浆中NO含量，取10%小鼠脑组织匀浆上清500μl 进行检测，结果如下，测得空白管吸光度为0.071，标准管吸光度为0.156，测定管吸光度为0.096。10%匀浆上清蛋白浓度为4.249g/L。则计算结果为：
NO含量(μmol/gprot)=(0.096-0.071)/(0.156-0.071)*20μmol/L÷4.249gprot/L=1.384μmol/gprot
参考取样量：
1．牛血清、羊血清 300μl，兔血清、鼠血清100μl。
2．10%组织匀浆一般取500μl；
3．细胞悬液一般取500μl，细胞培养液一般取100μl。
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本法利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-，通过显色反应测定其浓度的高低。本测试法灵敏、简便且较稳定，可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液、腹水、胸水、脑脊液、胃液、尿液等样本的NO浓度测定。
储存条件：2-8℃避光保存。
有效期：A和B 3个月，其余组分6个月。
注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
●试管 ● 涡旋混匀器 ● 移液器及吸头 ● 离心机 ● 550nm 的分光光度计 ● 37℃恒温水浴锅
使用方法：
一、试剂配制
1．混合试剂的配制：按试剂A：试剂B=1：1 配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，现用现配，24 小时内有效。试剂A，试剂B 使用前请放37℃水浴或室温使其溶解后混匀再用。
2．试剂E 工作液配制：
将试剂E 加入90～100℃热双蒸水20 mL中，隔水加热充分溶解；4℃避光保存。
[注]:试剂E 为过饱和溶液，所以在配制时最好用90～100℃热蒸馏水23ml(热胀冷缩)边隔水加热边用玻璃棒搅拌，以使其充分溶解。一次实验用不完再用时可能仍有结晶，用之前可以再次边隔水加热边玻璃棒搅拌使其溶解。
3．试剂F 工作液配制：
使用前将试剂F加入双蒸水8mL中溶解后备用；4℃避光保存(如颜色变为深咖啡色不可再用)。
4．显色剂配制：使用前配制，用多少配多少。试剂E 工作液︰试剂F 工作液︰试剂G＝2.5︰1︰1。若能在一个月内用完者也可一次配成。剩余显色剂避光保存。室温较低时会有结晶析出，再次使用时，放100℃水浴，反复摇动溶解后使用。
5．100μmoL/L标准工作液配制：取0.1 mL标准品(10mmoL/L)用双蒸水定容稀释至10mL(即100倍稀释)，混匀，即为100μmol/L标准应用液。
二、 操作步骤：
使用注意事项：
● 因组织中NO 含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
●试剂A、试剂B和标准品避免反复冻融，如果需要分多次实验，可以在第一次实验时将试剂A和试剂B、标准品分装后再保存，根据每次实验时的试剂用量取出使用。
● 配好的显色剂避光保存。
● 血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。
● 所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
● 样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。
● 需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
(一)血清、尿液、胃液、细胞培养液等样本检测
1．操作表：
注意：
1．室温较低时，所有的试剂均应置于37℃预热5分钟。
2．取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点。例如：可取0.4或0.45ml，但您同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。
2．计算公式：
血清、血浆中NO含量计算：
NO含量(μmol/L)=(测定OD值-空白OD值)/(标准OD值-空白OD值)×标准品浓度(100μmol/L)×样品测试前稀释倍数
3．计算举例：
测人血清中NO 含量，取人血清100μl 进行检测，结果如下，测得空白管吸光度为0.080，标准管吸光度为0.169，测定管吸光度为0.109。血清未稀释，则稀释倍数为1，将数据带入计算公式：
NO含量(μmol/L)=(0.109-0.080)/(0.169-0.080)*100μmol/L*1=32.584μmol/L
(二)、组织样本检测
1．操作表：
注意：
1．室温较低时，所有的试剂均应置于37℃预热5分钟。
2．取上清时，如果上清量不够，请延长离心时间，或者少取一点，但同一批实验所有的管子都应取上清的量要一致，千万不可将沉淀吸上。
2．组织样本NO含量计算：
NO含量(μmol/gprot)=(测定OD值-空白OD值)/(标准OD值-空白OD值)×标准品浓度(20μmol/L)÷待测样本蛋白浓度(gprot/L)
注：μmol/gprot为微摩尔/克蛋白。
3．计算举例：
测10%小鼠脑组织匀浆中NO含量，取10%小鼠脑组织匀浆上清500μl 进行检测，结果如下，测得空白管吸光度为0.071，标准管吸光度为0.156，测定管吸光度为0.096。10%匀浆上清蛋白浓度为4.249g/L。则计算结果为：
NO含量(μmol/gprot)=(0.096-0.071)/(0.156-0.071)*20μmol/L÷4.249gprot/L=1.384μmol/gprot
参考取样量：
1．牛血清、羊血清 300μl，兔血清、鼠血清100μl。
2．10%组织匀浆一般取500μl；
3．细胞悬液一般取500μl，细胞培养液一般取100μl。
相关搜索：一氧化氮检测试剂盒(硝酸还原酶法)